制備型高效液相色譜儀通常都被認(rèn)為和大容量色譜柱和高流速有關(guān)聯(lián)的。然而并不是以設(shè)備的大小和系統(tǒng)消耗的流動(dòng)相的多少來(lái)決定制備高效液相色譜,而是依據(jù)分離目的來(lái)決定。分析液相的目的是給一種組份進(jìn)行定量和定性。制備液相的目的是對(duì)產(chǎn)品的單體進(jìn)行提取和純化。與傳統(tǒng)的純化方法(如蒸餾、萃?。┍容^,制備液相是一種更有效的分離方法,因此被廣泛應(yīng)用在樣品和產(chǎn)品的提取和純化上。隨著合成、植化、生化和制藥等領(lǐng)域?qū)Ω呒兌冉M份的需求不斷增加,制備型液相色譜儀應(yīng)用的領(lǐng)域也在迅速的擴(kuò)大發(fā)展
高效液相色譜(HPLC)是近30年發(fā)展起來(lái)的一種具有高靈敏度、高選擇性的高效快速分離分析技術(shù)。它既能用于微量組分的分析測(cè)定,又能用于大量的制備分離,靈活多樣,其應(yīng)用范圍已超過(guò)其他各種分離方法,尤其在中藥樣品的分析分離方面更充分發(fā)揮它的特長(zhǎng),為推動(dòng)該領(lǐng)域的進(jìn)步和發(fā)展作出了巨大貢獻(xiàn)。
根據(jù)用途和泵配置的不同,一般可以將常見的實(shí)驗(yàn)室級(jí)別LC分為以下幾種:分析型高效液相色譜儀(HPLC),半制備液相色譜儀(Semi-Prep HPLC)和制備型高效液相色譜儀(Prep-HPLC)以及中壓液相色譜儀(MPLC)。這三者的原理基本一樣,不同之處主要在于泵的最大流速,一般而言,分析型HPLC的最大流速為10.00mL/min,半制備HPLC為50mL/min,制備HPLC為100mL/min,中壓液相色譜更高。而由于泵流速的升高,流通池的光程、體積,管道的內(nèi)徑,六通閥、定量環(huán)等零件也會(huì)相應(yīng)改變;并且,根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的需要,可以增加自動(dòng)接收器等配件。
我們了解了液相色譜儀和制備型液相色譜儀的不同點(diǎn),那么問(wèn)題來(lái)了,制備型高效液相色譜儀在什么領(lǐng)域里最常用?
目前,實(shí)驗(yàn)室級(jí)別的制備液相色譜主要用于以下領(lǐng)域:
1.天然藥物化學(xué)、中藥化學(xué)。這是國(guó)內(nèi)目前最廣泛的使用方法,為了弄清楚植物中的微量有效成分,開放手工色譜柱早已不夠用了,幾乎每個(gè)搞天然藥化的實(shí)驗(yàn)室都至少有一臺(tái)液相,土豪實(shí)驗(yàn)室人手一臺(tái)液相。
2.蛋白純化。相對(duì)于前者,蛋白純化的起步要稍微晚一點(diǎn),但是發(fā)展很迅速。同時(shí),由于外國(guó)儀器廠家在這個(gè)領(lǐng)域的優(yōu)勢(shì)不算太大,目前國(guó)內(nèi)也在這個(gè)領(lǐng)域加快發(fā)展,搶占地盤。
3.藥物雜質(zhì)純化。由于合成工藝并不能做到100%的產(chǎn)率,往往伴有副產(chǎn)品,如何獲得微量的雜質(zhì)并確定結(jié)構(gòu)和含量,這就得靠液相色譜。
4.手性化合物的制備。這個(gè)主要是有機(jī)合成和方法學(xué)的在用。
總之,目前有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域里,開放手工柱層析依然是最常用的分離手段,也是每個(gè)有機(jī)狗必會(huì)的技能之一,其在未來(lái)很長(zhǎng)一段時(shí)間里將仍然扮演重要的角色。制備液相已經(jīng)在天然藥化領(lǐng)域大面積使用,在將來(lái),隨著科研的需要和價(jià)格的下降,將會(huì)逐漸進(jìn)入千家。