液相色譜儀對于多數人來(lái)說(shuō)都是很好上手的儀器了，但是就算是用過(guò)幾年、經(jīng)驗豐富的分析員都會(huì )習慣于一些錯誤的操作，經(jīng)常導致一些儀器故障。
方便快捷的分析過(guò)程固然重要，但是為了多做樣品而忽略了一些必不可少的步驟，往往得不償失，哪些操作不能做？哪些懶兒不能偷？那些小概率的故障師傅沒(méi)教怎么辦？液相使用過(guò)程中有哪四大關(guān)鍵因素要注意？譜析色譜小編一一告訴你哦！
哪些操作不能做？哪些懶兒不能偷？
1、流動(dòng)相不過(guò)濾
因為塵?；蚱渌魏坞s質(zhì)微粒都會(huì )磨損柱塞、密封環(huán)、缸體和單向閥，因此應預先除去流動(dòng)相中的任何固體微粒。流動(dòng)相最好在玻璃容器內蒸餾，而常用的方法是濾過(guò)，可采用Millipore濾膜（0.2μm或0.45μm）等濾器。泵的入口都應連接砂濾棒（或片）。輸液泵的濾器應經(jīng)常清洗或更換。
2、使用后沒(méi)有及時(shí)清洗泵
流動(dòng)相不應含有任何腐蝕性物質(zhì)，含有緩沖液的流動(dòng)相不應保留在泵內，尤其是在停泵過(guò)夜或更長(cháng)時(shí)間的情況下。如果將含緩沖液的流動(dòng)相留在泵內，由于蒸發(fā)或泄漏，甚至只是由于溶液的靜置，就可能析出鹽的微細晶體，這些晶體將和上述固體微粒一樣損壞密封環(huán)和柱塞等。因此，必須泵入純水將泵充分清洗后，再換成適合于色譜柱保存和有利于泵維護的溶劑（對于反相鍵合硅膠固定相，可以是甲醇或甲醇-水）。
3、流動(dòng)相走空
泵工作時(shí)要留心防止溶劑瓶?jì)鹊牧鲃?dòng)相被用完，否則空泵運轉也會(huì )磨損柱塞、缸體或密封環(huán)，最終產(chǎn)生漏液。
4、沒(méi)有流動(dòng)相流出，又無(wú)壓力指示
可能是泵內有大量氣體，這時(shí)可打開(kāi)泄壓閥，使泵在較大流量（如5ml/min）下運轉，將氣泡排盡，也可用一個(gè)50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體。
另一個(gè)可能原因是密封環(huán)磨損，需更換。
5、壓力和流量不穩
原因可能是氣泡，需要排除；或者是單向閥內有異物，可卸下單向閥，浸入丙酮內超聲清洗。有時(shí)可能是砂濾棒內有氣泡，或被鹽的微細晶?；蜃躺奈⑸锊糠侄氯?，這時(shí)，可卸下砂濾棒浸入流動(dòng)相內超聲除氣泡，或將砂濾棒浸入稀酸（如4mol/L硝酸）內迅速除去微生物，或將鹽溶解，再立即清洗。
壓力為啥過(guò)高或過(guò)低？
可能是是管路被堵塞，需要清除和清洗。壓力降低的原因則可能是管路有泄漏。檢查堵塞或泄漏時(shí)應逐段進(jìn)行。
在進(jìn)行梯度洗脫時(shí)，由于多種溶劑混合，而且組成不斷變化，因此帶來(lái)一些特殊問(wèn)題，必須充分重視。
PS：在液相色譜中對組分復雜的樣品采用梯度洗脫的方法。在同一個(gè)分析周期中，按一定程序不斷改變流動(dòng)相的濃度配比，稱(chēng)為梯度洗脫。從而可以使一個(gè)復雜樣品中的性質(zhì)差異較大的組分能按各自適宜的容量因子k達到良好的分離目的。
梯度洗脫的優(yōu)點(diǎn)：1.縮短分析周期；2.提高分離能力；3.峰型得到改善，很少拖尾；4.增加靈敏度。但有時(shí)引起基線(xiàn)漂移。
6、梯度洗脫的流動(dòng)相選擇不當
要注意溶劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動(dòng)相。有些溶劑在一定比例內混溶，超出范圍后就不互溶，使用時(shí)更要引起注意。當有機溶劑和緩沖液混合時(shí)，還可能析出鹽的晶體，尤其使用磷酸鹽時(shí)需特別小心。
7、忽略的空白梯度洗脫
梯度洗脫所用的溶劑純度要求更高，以保證良好的重現性。進(jìn)行樣品分析前必須進(jìn)行空白梯度洗脫，以辨認溶劑雜質(zhì)峰，因為弱溶劑中的雜質(zhì)富集在色譜柱頭后會(huì )被強溶劑洗脫下來(lái)。用于梯度洗脫的溶劑需徹底脫氣，以防止混合時(shí)產(chǎn)生氣泡。
8、忽略了溶劑洗脫所帶來(lái)的粘度變化
混合溶劑的粘度常隨組成而變化，因而在梯度洗脫時(shí)常出現壓力的變化。例如甲醇和水粘度都較小，當二者以相近比例混合時(shí)粘度增大很多，此時(shí)的柱壓大約是甲醇或水為流動(dòng)相時(shí)的兩倍。因此要注意防止梯度洗脫過(guò)程中壓力超過(guò)輸液泵或色譜柱能承受的最大壓力。
9、六通閥的正確使用和維護
①樣品溶液進(jìn)樣前必須用0.45μm濾膜過(guò)濾，以減少微粒對進(jìn)樣閥的磨損。
②轉動(dòng)閥芯時(shí)不能太慢，更不能停留在中間位置，否則流動(dòng)相受阻，使泵內壓力劇增，甚至超過(guò)泵的最大壓力；再轉到進(jìn)樣位時(shí)，過(guò)高的壓力將使柱頭損壞。
③為防止緩沖鹽和樣品殘留在進(jìn)樣閥中，每次分析結束后應沖洗進(jìn)樣閥。通?？捎盟疀_洗，或先用能溶解樣品的溶劑沖洗，再用水沖洗。
10、色譜柱的使用和維護
色譜柱的正確使用和維護十分重要，稍有不慎就會(huì )降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過(guò)程中，需要注意下列問(wèn)題，以維護色譜柱。
調節流速太快
避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì )影響柱內的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會(huì )沖動(dòng)柱內填料，因此在調節流速時(shí)應該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉動(dòng)不能過(guò)緩（如前所述）。
反沖色譜柱
一般說(shuō)來(lái)色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì )迅速降低柱效。
預柱和保護柱
選擇使用適宜的流動(dòng)相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
避免將基質(zhì)復雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內，需要對樣品進(jìn)行預處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應該經(jīng)常更換。