液相色譜儀流動(dòng)相暴露于實(shí)驗(yàn)室環(huán)境時(shí),溶劑與大氣氣體平衡。在混合溶劑時(shí),空氣的溶解度低于純?nèi)軇┑南嗤壤?,并且過(guò)量的空氣會(huì)趨于鼓泡,可能會(huì)形成氣泡。氣泡會(huì)增加基線的噪音,造成靈敏度下降,甚至無(wú)法分析(噪聲增大,基線不穩(wěn),突然跳動(dòng))。溶解的氧氣還會(huì)導(dǎo)致樣品中某些組份被氧化,柱中固定相(如烷基胺)發(fā)生反應(yīng),降解而改變柱的分離性能。溶解氧能與某些溶劑(如甲醇、四氫呋喃)形成有紫外吸收的絡(luò)合物,此絡(luò)合物會(huì)提高背景吸收(特別是在260nm以下),并導(dǎo)致檢測(cè)靈敏度的輕微降低,會(huì)在梯度淋洗時(shí)造成基線漂移或形成鬼峰(假峰)。若用FLD(熒光檢測(cè)器),溶解氧在一定條件下還會(huì)引起淬滅現(xiàn)象,特別是對(duì)芳香烴、脂肪醛、酮等。在某些情況下,熒光響應(yīng)可降低達(dá)95%。
液相色譜儀流動(dòng)相脫氣的作用
除去其中溶解的氣體(如O2),以防止在洗脫過(guò)程中當(dāng)流動(dòng)相由色譜柱流至檢測(cè)器時(shí),因壓力降低而產(chǎn)生氣泡。
排出氣泡能減少泵工作的傷害,提高UV檢測(cè)器的性能高,改善靈敏度。液相色譜儀流動(dòng)相脫氣的方式
加熱回流法:效果較好,但操作復(fù)雜,且有毒性揮發(fā)污染,同時(shí)需要考慮低沸點(diǎn)溶劑揮發(fā)造成的組成變化。
抽真空脫氣法:易抽走有機(jī)相。
超聲脫氣法:流動(dòng)相放在超聲波容器中(一般500ml溶液需超聲20~30min),此法不影響溶劑組成。超聲時(shí)應(yīng)注意避免溶劑瓶與超聲槽底部或壁接觸,以免玻璃瓶破裂,容器內(nèi)液面不要高出水面太多。
氦氣脫氣法:在色譜操作前和進(jìn)行時(shí),將惰性氣體噴入溶劑中。嚴(yán)格來(lái)說(shuō),此方法不能將溶劑脫氣,它只是用一種低溶解度的惰性氣體(通常是氦)將空氣替換出來(lái)。主要利用液體中氦氣的溶解度比空氣低,連續(xù)吹氦脫氣,效果較好,但成本高。
在線真空脫氣法:利用在線脫氣機(jī)在線脫氣,智能控制,無(wú)需額外操作,成本低,脫氣效果明顯優(yōu)于以上幾種方法,并適用于多元溶劑體系。