在液相色譜儀分析中，在色譜柱正常，樣品濃度適宜，分析方法合適，色譜峰在出峰時(shí)間較短的條件下，峰型應對稱(chēng)而尖銳。但在實(shí)際操作中，如果對樣品不了解，前處理不恰當或者分析方法不合理等，會(huì )出現峰形不正常的情況，其中雙峰現象就是液相色譜中常見(jiàn)的問(wèn)題之一。出現雙峰的原因有哪些呢？
色譜雙峰指的是明明是同一種物質(zhì)，但在色譜圖中卻呈現雙峰，讓實(shí)驗人員誤認為含有兩種物質(zhì)。
出現液相色譜儀色譜圖出現“”雙峰“”的原因譜析色譜小編認為一般有以下幾種問(wèn)題
色譜柱的問(wèn)題
如果在樣品分析時(shí)發(fā)現每個(gè)色譜峰都有雙峰出現，尤其在采用單一純物質(zhì)時(shí)，則可以確定是色譜柱出現問(wèn)題了，一般是柱頭受損或者柱頭固定相污染引起的。
如果進(jìn)樣量少，原來(lái)色譜柱正常，色譜峰的形狀多為一大峰帶一小峰，不一定拖尾，這一般應是柱頭受堵，將色譜柱反過(guò)來(lái)接，用流動(dòng)相沖洗或酸洗或其它溶劑，將堵在柱頭的殘留物沖掉，再反過(guò)來(lái)，一般情況下就行了。當然不反沖，正沖有時(shí)也會(huì )正常的。
如果峰拖尾，雙峰強弱相差不大，柱頭固定相變臟或流失可能性更大，這時(shí)可以將進(jìn)樣頭擰開(kāi)，將微孔濾片超聲，柱頭刮去一部分填料，重新填上新填料擰緊，不過(guò)這個(gè)對技術(shù)要求較高且不能經(jīng)常做，否則用不了幾次，色譜柱就會(huì )應柱效降低而報廢。
如果上述不能解決問(wèn)題，可能是柱塌陷造成的，此時(shí)需要更換色譜柱。
溶劑問(wèn)題
目前HPLC分析多為反相色譜，流動(dòng)相多為甲醇、乙腈、水，加各種添加劑以改善分離性能。樣品一般用與流動(dòng)相相溶的溶劑溶解，最佳的溶解方法是用流動(dòng)相溶解。在實(shí)際分析中，有時(shí)候為了樣品的溶解性或穩定性加入了一點(diǎn)的緩沖液，緩沖液的酸堿性可能會(huì )導致樣品轉化，從而產(chǎn)生雙峰現象。此時(shí)需要更換緩沖液，調整溶劑pH值，或者用流動(dòng)相配置樣品。
此外，樣品要現配現用，避免樣品溶解液的有機相比例、pH值發(fā)生變化而導致的溶劑效應。
進(jìn)樣量
當用溶劑極性強度大的試劑，如純甲醇、純乙腈，純乙醇，而分析體系中以水為主時(shí)，如果樣品進(jìn)樣量大，如定量管為20ul，此時(shí)單一的純物質(zhì)會(huì )出現雙峰，第二峰比第一峰小(每次都不太一樣)，且拖尾，保留時(shí)間會(huì )提前(相對進(jìn)樣量少而言)，將進(jìn)樣量減少一半以上，峰型將變?yōu)檎?。這是樣品的溶劑與流動(dòng)相極性相差太大，而流動(dòng)相來(lái)不及將其稀釋達到平衡造成的，此情況下需要減少進(jìn)樣量。
另一個(gè)原因是，進(jìn)樣量不一定大，但絕對量很大，色譜圖上的雙峰緊靠在一起，基本上齊高，不拖尾(如果出峰很快，也可能是色譜柱問(wèn)題)。將樣品稀釋再進(jìn)樣就可以了，這是由于進(jìn)樣量過(guò)大，色譜柱過(guò)載造成的。
樣品特性問(wèn)題
有些樣品由于其化學(xué)結構的特點(diǎn)，存在互變異構現象，而這種互變異構體無(wú)法分開(kāi)，而是以一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡存在。在色譜分析時(shí)，在一個(gè)特定的條件下(如pH值、流動(dòng)相極性、溫度等)，一種物質(zhì)將出現雙峰，雙峰靠的很近，基本齊高，不拖尾，條件稍一變化，尤其pH，雙峰現象將消失，如紅霉素等。
有的樣品紫外的色譜圖上看不到雙峰，但在LC-MS下，用質(zhì)譜檢測器，其質(zhì)譜的總離子流圖上較明顯，如農藥啶蟲(chóng)瞇(吡蟲(chóng)清)。
pH值
體系pH值對色譜雙峰的影響出現在各個(gè)環(huán)節上(前面已經(jīng)提到)，尤其在緩沖液流動(dòng)相平衡過(guò)程中其影響更為明顯。當連續進(jìn)樣時(shí)，受pH的連續變化影響會(huì )經(jīng)常遇到這種雙峰的情況。另外，在樣品分析時(shí)，流動(dòng)相的pH盡量遠離被分析物的等電點(diǎn)，否則也容易引起雙峰的產(chǎn)生。在用離子對試劑分析時(shí)，選擇不好條件也會(huì )容易引起雙峰的產(chǎn)生。
