色譜儀系統在藥物研發(fā)中具有舉足輕重的作用，色譜數據完整性和合規性直接決定藥品注冊成敗。本文是氣相色譜儀廠(chǎng)家山東譜析基于多年藥物分析經(jīng)驗對色譜數據完整性理論的簡(jiǎn)淺總結，不妥之處，還望指正！
數據完整性是指數據和流程在其整個(gè)生命周期中的整體完整性、準確性和一致性。
雖然這看起來(lái)很簡(jiǎn)單，但真正以完整性和準確性生成、維護和轉換數據的整個(gè)過(guò)程對于任何從事藥物制造者來(lái)說(shuō)都是一項具有挑戰性的任務(wù)。而色譜數據完整性更是體現在色譜系統、對照品管理、樣品管理、原始記錄管理以及Excel驗證等方面。
色譜系統
色譜工作站
色譜工作站獲得的色譜數據應當可靠、安全、完整、可溯源。藥物制造者應該選擇、安裝和使用適合其既定用途的色譜系統，并可以得到穩定的售后服務(wù)。系統應符合法規要求和GMP要求，包括但不僅限于，確保數據采集、處理和存貯符合國家法律和可追溯、清晰、同步、原始和準確的原則。鼓勵采用經(jīng)規范和系統驗證的色譜工作站進(jìn)行研究工作，但并不是說(shuō)非要使用安捷倫系列、Empower、Solutions系列等軟件。不過(guò)國內色譜工作站的靠譜性值得商榷。目前國內大中型藥物制造從事者大部分已經(jīng)采用了本地無(wú)數據儲存的網(wǎng)絡(luò )版工作站，確保了數據的安全性、可靠性和完整性。
驗證與確認
色譜儀系統在進(jìn)行藥物制造行為前需要按照經(jīng)過(guò)批準的驗證方案進(jìn)行驗證。色譜系統驗證和確認的范圍和程度應根據風(fēng)險管理原則確定。驗證和確認應在方案中進(jìn)行說(shuō)明，并記錄在報告中。報告中應包括文件化證據，如截屏、打印輸出或其它作為驗證和確認的一部分所執行檢測的源數據。數據應提供證據證明系統性能一致性，以及結果可靠準確。參數（例如但不僅限于密碼控制、審計追蹤、訪(fǎng)問(wèn)和權限）應在驗證和確認時(shí)說(shuō)明并核對。如發(fā)現任何校正參數超出校準范圍或不符合既定限度，則應進(jìn)行根本原因分析、影響性分析和風(fēng)險評估。應采取適當的CAPA。
1）新購氣相色譜儀、液相色譜儀系統需要進(jìn)行驗證，并組織好相關(guān)文件的撰寫(xiě)和審評，下圖是相關(guān)文件梳理。
當然上述所有行為均是由總驗證計劃所決定的，有些色譜實(shí)驗室還將操作確認和性能確認合并成OPQ或將安裝確認和操作確認合并成IOQ，但一般不建議將三者合并形成IOPQ。具體詳見(jiàn)筆者撰寫(xiě)的《色譜系統驗證和確認理論》。
2）舊色譜儀系統應該約定周期性進(jìn)行期間核查進(jìn)行再確認，已確定系統是否滿(mǎn)足使用。每年需經(jīng)具有鑒定資格的鑒定機構對儀器進(jìn)行鑒定并出具合格證。
訪(fǎng)問(wèn)與權限
1) Windows賬戶(hù)應只有一個(gè)管理員賬戶(hù)，管理員賬戶(hù)僅限于系統維護使用。對于每個(gè)實(shí)驗人員應該分別有自己獨立的賬戶(hù)和密碼，每個(gè)賬戶(hù)僅有寫(xiě)入和讀取權限。所有賬戶(hù)應該設置計算機屏幕保護，并在短時(shí)間內自動(dòng)鎖屏。即使管理員也不應該具備刪除數據，更改系統時(shí)間的權限。
2）工作站應有標準操作程序（SOP）規定色譜儀系統用戶(hù)組和用戶(hù)的創(chuàng )建與刪除，寫(xiě)明為每個(gè)用戶(hù)所分配的權限。記錄應保存。每個(gè)組內的用戶(hù)應有適當資質(zhì)可承擔指定的職責和權限。用戶(hù)組、用戶(hù)及其權限的手工記錄應與電子數據相一致。應該建立一個(gè)關(guān)于密碼的SOP。工作站在無(wú)操作時(shí)應短期內鎖定。即使管理員也不應該具備刪除數據的權限。
審計追蹤
以往我們使用的ChemStation、Solution等工作站并不具備審計追蹤功能，隨著(zhù)藥物審查的日益嚴格，大部分色譜工作站廠(chǎng)家均升級了自己的工作站。目前國內各大型藥企均已配備具備審計追蹤功能的色譜工作站。在色譜工作安裝開(kāi)始即應全面激活審計追蹤功能，并在色譜系統的生命周期中保持一致處于激活狀態(tài)。審計追蹤應根據SOP進(jìn)行審核。應有證據證明對審計追蹤進(jìn)行了日常（每次色譜分析）和定期審核。審計追蹤是元數據的一部分，應作為所有色譜數據系列一并存貯。下表是筆者對色譜實(shí)驗室審計追蹤的基本要求做簡(jiǎn)單總結概括：
簽名
目前可以校驗個(gè)人身份的方式主要有：手簽名、電子簽名、生物測定學(xué)以及數字簽名。其中電子簽名是色譜儀系統中常用的方式。電子簽名是指一種有一個(gè)人執行、采用或批準成為與其個(gè)人的手寫(xiě)簽名具有相同的法律效力的計算機數據的任意符號或一系列符合的編譯。下表是電子簽名的一般要求
色譜柱
色譜柱是色譜系統中的核心部分，在進(jìn)行藥物制造行為時(shí)應選用合適的經(jīng)過(guò)批準的供應商提供的色譜柱，新收到色譜柱應該進(jìn)行驗收（包括柱效測試）并形成記錄歸檔。應該建立色譜柱使用檔案（因至少包括使用時(shí)間區間、用途、使用狀況、最后封存液體等）。每次實(shí)驗應該詳細記錄色譜柱信息。應該按照經(jīng)批準的色譜柱再生SOP進(jìn)行再生。退役色譜柱應該由相關(guān)的退役流程并貼標識統一管理。
溶劑及流動(dòng)相
溶劑、緩沖液和流動(dòng)相制備、存貯和使用應根據批準的質(zhì)量標準、程序和藥典。應在其經(jīng)過(guò)驗證的有效期內使用。詳細記錄配制過(guò)程并準確記錄所用到化學(xué)品、試劑和其他物料的信息（至少包括廠(chǎng)牌、批號、級別等）。溶劑及流動(dòng)相的使用應該按照SOP操作。
色譜方法
1）采集方法
詳細記錄采集方法開(kāi)發(fā)過(guò)程并且對確定的采集方法進(jìn)行詳細的方法學(xué)驗證，這些工作應由有資質(zhì)有經(jīng)驗的人員按要求進(jìn)行。經(jīng)過(guò)方法學(xué)驗證后的采集方法應盡可能由指定人員創(chuàng )建和保存在色譜系統中。采集方法不應隨意進(jìn)行修訂，如需修訂應由授權人員根據其意向目的進(jìn)行批準，修改后重新進(jìn)行方法學(xué)驗證才可以進(jìn)行產(chǎn)生效力的樣品測定。應規定樣品序列，對照液、樣品溶液和空白溶液進(jìn)樣瓶應進(jìn)行核對以確保色譜系統進(jìn)樣序列正確。
最好不要“試針”、“系統檢查進(jìn)針”或其它未規定作為樣品序列一部分的進(jìn)針。例外情形需要使用時(shí)，應在批準程序里清楚說(shuō)明。但只有對照溶液可以用于此目的，樣品是絕對不能進(jìn)行“試針”檢查的。最好記錄進(jìn)樣前序列表和進(jìn)樣后序列表，這樣可以對比進(jìn)樣前后的實(shí)際情況，除非色譜工作站具有此功能。每個(gè)樣品序列表應單獨跟蹤空白對照，可以監測是否會(huì )產(chǎn)生干擾。應該制定系統適用性的可接受范圍。
2）處理方法
所采集的結果應使用經(jīng)過(guò)驗證的方法進(jìn)行處理。所選方法應可追溯，并反映在審計追蹤里。處理方法應該符合可追溯、清晰、同步、原始和準確的原則。處理方法應該根據實(shí)際情況調整斜率靈敏度、噪聲閾值、峰寬、峰面積閾值和集束因子及撇去比率的參數。一般來(lái)說(shuō)色譜峰準確積分的必要條件是所有峰能完全分離。如果必須從未分開(kāi)的峰中獲得定量數據，則實(shí)驗室應制訂明確的方針說(shuō)明如何對這些峰進(jìn)行積分。其中應包括闡明何時(shí)可使用不同函數對未分離的峰進(jìn)行積分。
如撇去設置、通過(guò)設置峰谷比和峰高比來(lái)調整等。一般來(lái)說(shuō)是不建議手動(dòng)積分的，非要進(jìn)行手動(dòng)積分應該按照建立的手動(dòng)積分SOP進(jìn)行并保存好記錄。自動(dòng)積分和手動(dòng)積分的譜圖必須同時(shí)保存。手動(dòng)積分應該按最差情況積分。積分過(guò)程中的平滑處理是要經(jīng)過(guò)論證處理的。色譜系統應該獨立保存每次數據處理后的結果并且保證每次結果可讀。同一樣品序列應該使用同一個(gè)處理方法。
數據管理
所有數據在災難（如儀器故障、病毒、硬件或軟件故障和斷電）發(fā)生時(shí)可恢復。所獲取的色譜數據應可追溯、清晰、原始和準確。數據應根據程序備份，記錄應保存作為證據。應特別注意確保單機系統數據備份要頻繁，以防止數據遺失。數據應安全存貯，包括對數據訪(fǎng)問(wèn)進(jìn)行控制。備份數據應按指定時(shí)間間隔隨機抽取進(jìn)行恢復和驗證。完整數據應保存適當時(shí)長(cháng)，期間可進(jìn)行數據核查、注冊申報或其它。
對照品管理
對接收的對照品需進(jìn)行驗收（對照品名稱(chēng)、數量、有效期、供應商、外觀(guān)狀態(tài)、純度復核及對照品證書(shū)），合格后進(jìn)行登記入賬，并按說(shuō)明書(shū)或指定的儲存條件嚴格儲存。一般按標準品的規定貯存期限執行，沒(méi)有期限的原則上化學(xué)提純物標準品為3年（生物試劑和不穩定的以6～12個(gè)月為宜）。對照品純度標定在在驗收時(shí)一并進(jìn)行。
實(shí)驗人員根據項目，領(lǐng)用對照品，對照品管理員根據標準品存放位置，尋找標準品交于實(shí)驗人員。實(shí)驗人員初步驗收對照品后，填寫(xiě)領(lǐng)用記錄，記錄應至少包括（對照品名稱(chēng)、純度、廠(chǎng)家、規格、批號、領(lǐng)用時(shí)間、領(lǐng)用人、用途、領(lǐng)用前質(zhì)量和領(lǐng)用后質(zhì)量等信息）。對照品的第一個(gè)開(kāi)封者，應將對照品的開(kāi)瓶日期、純度、有效期標注于標準品瓶上，并簽名。色譜實(shí)驗室用到的所有對照品都應該有合理的有效期，對照品的有效期應基于廠(chǎng)家提供、歷史數據的總結或穩定性研究的結果。對照品過(guò)期或出現異常無(wú)法使用時(shí)，應提出銷(xiāo)毀申請，不能私自處理。
由對照品管理員記錄。記錄內容至少包括品名、規格、數量、銷(xiāo)毀原因、購入單位、購入日期、申請人、批準人。對照品溶液的配制過(guò)程應該詳細記錄并標注配置信息、儲存條件及有效期。所用官方、第二或工作對照品應可通過(guò)保存的記錄追溯其采購、配制、存貯和使用情況。
樣品管理
樣品進(jìn)入色譜儀實(shí)驗室應該填寫(xiě)樣品送檢單（送檢單應至少記錄送檢樣品名稱(chēng)、送檢數量、批號、送檢人、結構式、儲存條件、外觀(guān)及簡(jiǎn)單物理性質(zhì)等）。應錄入適當記錄，確保樣品詳細信息和分析可追溯。樣品也應簡(jiǎn)單記錄使用情況，例如使用前質(zhì)量、使用后質(zhì)量、使用日期、用途使用人等。
原始記錄管理
原始記錄管理見(jiàn)筆者撰寫(xiě)的《依6M分析法形成的藥物科研實(shí)驗室中的原始記錄》及《藥物分析測定中修約規則理論》。在此不做贅述。
Excel驗證
色譜實(shí)驗中最常用的計算輔助工具就是Excel，Excel也是色譜數據完整性必不可少的條件，因此保證Excel數據的可追溯、清晰、原始和準確是十分必要的。使用Excel計算一些關(guān)鍵數據（產(chǎn)品放行、關(guān)鍵控制指標）前，需要對Excel進(jìn)行驗證。對于色譜實(shí)驗室來(lái)說(shuō)只需要驗證用Excel軟件創(chuàng )建的電子表格中的內容。主要包括計算公式、數據引用、數據檢查、數據格式、數據精度等。具體驗證理論見(jiàn)筆者撰寫(xiě)的《色譜實(shí)驗室中Excel數據可靠性驗證理論》。
結語(yǔ)
以上是氣相色譜儀廠(chǎng)家山東譜析根據多年經(jīng)驗并結合國外理論對色譜實(shí)驗室數據完整性相關(guān)要求的漫談。保證色譜實(shí)驗室的數據可追溯、清晰、原始和準確是一項及其復雜繁重的工作。任何理論性指導原則僅是我們從事色譜行為的基本，只有在實(shí)驗中不斷積累經(jīng)驗，養成保證色譜數據完整性的習慣，才能真正做出可追溯、清晰、原始和準確的色譜數據。更多儀器資訊可與公司在線(xiàn)客服聯(lián)系溝通，也可撥打24小時(shí)服務(wù)熱線(xiàn)13276328166 進(jìn)行聯(lián)系。
